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當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的水提工藝的探討
［摘 要］ 目的：優(yōu)選當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的水提工藝。方法：以處方中所含有效成分芍苷含量為評價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)，對影響煮提效果的諸因素(加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù))進(jìn)行了優(yōu)選，最后確定提取工藝。結(jié)果：優(yōu)選當(dāng)歸養(yǎng)血口服液以加水10倍，煎煮3次，每次時(shí)間為60 min提取效果最好。結(jié)論：該提取工藝可行，試驗(yàn)結(jié)果為確定當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的提取工藝提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
［關(guān)鍵詞］ 當(dāng)歸養(yǎng)血口服液；提取工藝；正交試驗(yàn)
當(dāng)歸養(yǎng)血口服液是由當(dāng)歸、川芎、黨參、甘草、白芍、黃芪、阿膠等組成的口服液制劑，具有調(diào)補(bǔ)氣血等功能，主治氣血兩虛之病證。上用于久病、病后失調(diào)、失血過多及一切慢性消耗性病證，癥狀見面色萎黃或蒼白、渾身無力、頭暈心悸、氣短懶言、舌淡白、脈象細(xì)弱或虛大無力等。該制劑系在古方“八珍丸”加味基礎(chǔ)上經(jīng)劑型改革制成的院內(nèi)制劑，經(jīng)多年的臨床應(yīng)用，療效確切。為了提高該制劑的質(zhì)量，筆者對當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的提取工藝進(jìn)行了研究。由于當(dāng)歸、川芎、白術(shù)等藥材均含有揮發(fā)油，分別約為0.42％、1％和1.4％［1］，因此，我們先將該部分藥材進(jìn)行水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，以免后期工藝中損失，然后將藥渣及其他藥材(阿膠除外)以水為溶媒進(jìn)行煎煮，再用乙醇沉淀除取雜質(zhì)，阿膠以打碎并烊化形式加入濾液中。本文采用正交試驗(yàn)，以處方中所含有效成分芍藥苷含量為評價(jià)指標(biāo)，篩選出合理的水提工藝。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。
1 儀器與試藥
島津LC?6A高效液相色譜儀；SPD?6AV型紫外檢測器；超聲波清洗儀：華南超聲儀器廠；天平：Precisa 57871(全華科學(xué)儀器有限公司)；芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)；實(shí)驗(yàn)藥材(市售，經(jīng)鑒定符合藥典規(guī)定)；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 水提工藝的正交試驗(yàn)篩選 選擇影響提取效果的主要因素：加水量(A)、提取時(shí)間(B)、煎煮次數(shù)(C)作為考察對象，以芍藥苷含量為評價(jià)指標(biāo)，每個(gè)因素確定不同的水平進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平見表1，L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。
表1 因素水平表（略）
2.2 供試品溶液的制備 取處方量的藥材(阿膠除外)共9份，按表2所列不同條件進(jìn)行提取，其中的當(dāng)歸、川芎、白術(shù)等藥材先提取揮發(fā)油2 h后，再將藥渣與其他藥材共同提取。將每組的水提液按工藝制成相應(yīng)的口服液。精密稱取本品2 ml，胃水浴上蒸近干，殘?jiān)眠m量的稀乙醇溶液并分次轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，超聲處理30 min，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液10 ml，加在中性氧化鋁柱(4 g，200目～300目)上，用稀乙醇25 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用稀乙醇分次溶解殘?jiān)D(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中并稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，制得供試品溶液。
2.3 對照品溶液制備 精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品12.5 mg，置25 ml容量瓶中，加稀乙醇適量，振搖使溶解，并用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，超聲除去氣泡，用稀乙醇補(bǔ)足至刻度，搖勻后作為對照品溶液。
2.4 色譜條件［2］ 色譜柱：HypersilC 18柱(4.6 mm*250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇?水(28∶72)；流速：0.8 ml／min；紫外檢測波長：λ=230 nm；進(jìn)樣量：20 μl；柱溫：25 ℃；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)≤10 000。
2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取對照品溶液0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻；分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，并以芍藥苷的進(jìn)樣量(μg／μl)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積(A*105)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：Y=2.648×106X+5.553×103，相關(guān)系數(shù)r=0.999 1。結(jié)果表明：芍藥苷進(jìn)樣量在0.25 μg～2.5 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.6 回收率試驗(yàn) 精密吸取已知含量的當(dāng)歸養(yǎng)血口服液1.0 ml，準(zhǔn)確加入一定量的芍藥苷，按2.2項(xiàng)“供試品溶液的制備”方法制成供試品溶液，再按“含量測定方法”依法操作，回收率為98.76％，RSD=1.53％。
2.7 樣品中芍藥苷含量測定 取對照品溶液(0.05 mg／ml)與供試品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過后，按上述的色譜條件分別精密進(jìn)樣20 μl，測定峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算求得各樣品中芍藥苷含量，由此確定正交試驗(yàn)的含量測定方法。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，對表2進(jìn)行分析，結(jié)果見表3。
表2 正交試驗(yàn)安排與結(jié)果（略）
注：*為同一樣品3次測定值的平均值。
表3 芍藥苷含量方差分析結(jié)果（略）
2.8 結(jié)果分析 由表2可知，當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的水提工藝條件以A3B1C3為佳，即加10倍量水煎煮3次，60 min/次，同時(shí)提示，影響水提效果的主要因素是提取次數(shù)，其次是加水量，煎煮時(shí)間影響最小，為驗(yàn)證直觀分析結(jié)果，我們對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了方差分析，結(jié)果提取次數(shù)對水提效果的影響具有十分顯著性意義，這與直觀分析結(jié)論也是相同的。
2.9 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按上述確定的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證。取相同量的藥材3份，按最佳工藝條件進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，測得芍藥苷的含量分別為0．931 2 mg／ml、0．934 7 mg／ml、0．930 6 mg／ml，與正交表中的試驗(yàn)結(jié)果比較，認(rèn)為驗(yàn)證結(jié)果較為滿意。因此，確認(rèn)當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的水提最佳工藝條件為加10倍量水煎煮3次，60 min/次。
3 討論
筆者通過對當(dāng)歸養(yǎng)血口服液的水提工藝進(jìn)行研究，確定了最佳工藝，即先將當(dāng)歸、川芎、白術(shù)等藥材進(jìn)行水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，然后將藥渣及其他藥材(阿膠除外)以水為溶媒進(jìn)行煎煮，加10倍藥材量的水煎煮3次，60 min/次，在驗(yàn)證試驗(yàn)中所得芍藥苷的含量與正交試驗(yàn)中所得芍藥苷的含量基本一致，表明優(yōu)選出的水提工藝為最佳提取工藝。本品是在古方“八珍湯”的基礎(chǔ)上加味改劑型制成的中藥制劑，由補(bǔ)氣健脾之四君子湯與補(bǔ)血調(diào)血的四物湯，再加入黃芪和阿膠配合組成的氣血雙補(bǔ)方，方中用黨參、黃芪、熟地補(bǔ)氣血為主藥，輔以白術(shù)、茯苓益氣健脾燥濕；當(dāng)歸、阿膠、白芍養(yǎng)血和營；川芎行氣活血，甘草和中益氣、調(diào)和諸藥。研究表明本品具有強(qiáng)心、興奮造血系統(tǒng)、調(diào)節(jié)子宮機(jī)能等作用。
參考文獻(xiàn)：
［1］ 鄭虎占，董澤宏，佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用［M］.北京：學(xué)苑出版社，1997：1807.
［2］ 葉立新，賴素萍，等.當(dāng)歸養(yǎng)血口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中華藥雜志，2005，20(增刊)：293.
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