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探討薄層掃描測定蛇床子素含量的優點-職稱論文
畢業論文蛇床子為傘形科植物蛇床［Cnidium monnieri(L)Cuss.］的干燥成熟果實，具有溫腎壯陽、燥濕、祛風殺蟲之功效［1］，中醫主要用來治療外陰濕疹、瘙癢、滴蟲性陰道炎、急性滲出性皮膚病等病癥。蛇床子主產于河北、山東、江蘇、浙江、4川等地，分布遍及全國各地，其主要有效成分為數種香豆素類化合物，其中蛇床子素是主要活性成分，含量最高，約占0.8%左右，約占總香豆素的60%［2］。蛇床子素（甲基歐芹酚Osthole, Ost）分子式為C15H16O3，化學名稱為7–甲氧基–8–異戊烯基香豆素，分子量244.29。蛇床子素有降壓作用［3］，心臟抑制作用［4］，促學習記憶作用［5］，性激素樣作用［6～8］，調節骨代謝 ［9, 10］，增強免疫力等作用［10］。蛇床子素具有很高的臨床應用價值，本實驗以薄層掃描法為測定其含量的方法優選了提取工藝從而為其在臨床上的應用做好了前期的工作。
1 材料與方法
1.1 藥品與儀器
1.1.1 藥品 中藥蛇床子，產地河北，購于張家口市華佗藥房；蛇床子素標準品購于南京青澤綠生植物有限公司；石油醚,乙醇,甲醇,乙酸乙酯均為分析純；CMC-Na硅膠G板（市售，10cm×5cm）。
1.1.2 儀器 WFH-203B型3用紫外分析儀(上海精科實業有限公司);KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;KH-3000型薄層色譜掃描儀（上海科哲生化科技有限公司）;SP-Ⅱ型薄層電動點樣器（上海科哲生化科技有限公司）;RE-52AA型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）。
1.2 方法
1.2.1 供試品的制備
回流提取：稱取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下加熱回流360min，趁熱抽濾，得濾液Ⅰ。重復上1步得濾液Ⅱ、Ⅲ。合并3次濾液在旋轉蒸發器中75℃恒溫蒸餾。蒸發至少量液體后，用95%乙醇定容至100mL。1mL溶液相當于0.5g的蛇床子。作為供試品溶液1。
索氏提取：稱取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下恒溫索氏提取600min，直至提取器中的乙醇液澄清，制備濾液。蒸餾，乙醇定容，使其每1mL溶液相當于0.5g的蛇床子。作為供試品溶液2。
超聲波提取：稱取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下超聲提取40min［11］ 制備濾液。蒸餾，乙醇定容后的濾液作為供試品溶液3。
1.2.2 對照品溶液的制備
陽性對照品溶液:精密稱取蛇床子素標準品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混勻,每1mL溶液相當于5.1mg的蛇床子素標準品。
陰性對照品溶液:精密稱取大黃素標準品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混勻，每1mL溶液相當于5.1mg的大黃素標準品。
1.2.3 薄層及掃描條件
蛇床子素標準品在薄層板上點樣后于200～400nm處進行光譜掃描，在322nm處有1個較大吸收峰，在370nm處1個小吸收峰。為減少誤差采用雙波長反射法鋸齒掃描，λS=322nm,λR=370nm，SX=3。采用外標兩點法定量。 以石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2為展開劑在CMC-Na硅膠G板上上行展開。1.2.4 點樣及展開 用薄層電動點樣器按照“對照品2μL，供試品2μL，對照品4μL” 圖1 紫外燈下觀察結果 (1、3標準品溶液；2供試品溶液）順序點于同1硅膠G板上，上行展開25min，晾干后置于365nm紫外燈下觀察，用直尺對蛇床子素的熒光斑點定位。同法用大黃素（不含蛇床子素）做陰性對照。
2 結果
在本實驗條件下，樣品中的蛇床子素與蛇床子素標準品的熒光斑點重心在同1直線上,斑點圓潤、清晰無拖尾現象,主斑點與其他斑點分離較好（見圖1）。蛇床子素標準品的Rf值為 0.49±0.04（n=9）。
3種提取方法得到的蛇床子中蛇床子素的含量結果見表1。表1 不同方法提取蛇床子中蛇床子素含量比較（略 ）
3 討論
蛇床子素用展開劑系統Ⅰ(石油醚∶乙酸乙酯=15∶2)［12］，在紫外燈下觀察發現樣品中的成分尚未分離開，依次考察了展開劑系統Ⅱ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶1)，系統Ⅲ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=14∶2∶1)，系統Ⅳ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2)。結果為系統Ⅳ展開蛇床子素結果最理想，無拖尾現象。
定量分析包括①洗脫測定法：試樣經展開分離后，將該組分的斑點連吸附劑1齊刮下或取下，然后將該組分從吸附劑上洗脫下來，收集洗脫液，進行定量測定，測定的方法1般采用分光光度法或比色法。②直接測定法：試樣經色譜分離后，在薄板上對斑點進行直接測定。薄層掃描法定量測定速度快，準確度好，誤差范圍1般在±2%～±5%內操作簡單，誤差小。
本實驗粗略地比較了3種提取方法，結果表明同1溫度下超聲波提取法的提取率最高。從實際來看，此實驗僅為實驗室提取蛇床子素的初步工作，在此基礎上可優選出更好的提取條件，為蛇床子素在藥理方面的研究做好前期工作。【參考文獻】
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