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淺談膽木成分的方法學(xué)考察
1 儀器與試藥
Waters 515高效液相色譜儀；國家藥典委員會2004年A 版“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”。色譜純甲醇，試驗用水為純凈水，其他試劑均為分析純。異長春花苷內(nèi)酰胺對照品（中國藥品生物制品檢定所，110831-200302）；膽木藥材共10批，采自海南五指山地區(qū)栽培地不同區(qū)域，經(jīng)中國醫(yī)科院興隆分所陳偉平教授鑒定。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件色譜柱為Diamonsil TM C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測波長為227 nm；柱溫為30℃；流動相為甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脫，洗脫時間為70 min， 流速為1.0 ml/min；進(jìn)樣量為20 μl，所有組分在70 min內(nèi)出峰完畢。梯度洗脫條件見表1。
2.2 溶液制備
2.2.1 對照品溶液制備精密稱取異長春花苷內(nèi)酰胺對照品適量，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶液適量溶解，并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度大約為160 μg/ml的對照品溶液。表1 梯度洗脫條件（略）
2.2.2 供試品溶液制備取膽木藥材0.5 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 ml，稱重，于沸水浴中加熱回流40 min，放冷，稱重，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液適量，以0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。
2.3 方法學(xué)考察
2.3.1 精密度實驗取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄其圖譜。計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值的RSD。 結(jié)果表明，RSD分別為0.09% ～0.21%和0.19%～2.55%,均小于3.0%，符合指紋圖譜的要求。
2.3.2 穩(wěn)定性實驗取同一份供試品溶液，分別于制備后0, 2, 4, 8, 16, 24 h進(jìn)樣，記錄其圖譜。計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值的RSD。 結(jié)果表明，RSD分別為0.06%～0.23%和0.21～2.68%，均小于3.0%,符合指紋圖譜的要求。
2.3.3 重復(fù)性實驗取同一批次的膽木6份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，記錄其圖譜。計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值的RSD。 結(jié)果表明，RSD分別為0.08%～0.22%和0.21%～2.94% ,均小于3.0% ,符合指紋圖譜的要求。
在我國已用膽木制成注射液及膽木浸膏片，治療鉤端螺旋體和上呼吸道感染［1］。文獻(xiàn)報道［2，3］海南膽木中有效成分為生物堿類，其中異長春花苷內(nèi)酰胺（isovincosidelactone）含量較高。提取溶劑的選擇取同樣量的海南膽木藥材分別采用純乙醇，70%乙醇，50%乙醇，70%甲醇，50%甲醇進(jìn)行加熱回流提取，并將提取液進(jìn)行HPLC分析。結(jié)果表明，以70%乙醇提取液的色譜峰強(qiáng)度最大，故選擇70%乙醇為提取溶液。
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