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血必凈對大鼠急性胰腺炎保護作用機制探討
【摘要】 目的 探討血必凈對大鼠急性胰腺炎的保護作用及機制。方法 SD大鼠48只, 隨機分為假手術組、胰腺炎組和治療組，每組再分為4 h、8 h亞組。假手術組僅行開關腹手術，胰腺炎組以牛磺膽酸鈉造模，治療組以血必凈干預。光鏡觀察胰腺組織病理改變，免疫組化法測胰腺組織腫瘤壞死因子(TNF)-α、干擾素(IL)-1β。結果 治療組胰腺組織損傷較胰腺炎組明顯減輕，治療組胰腺組織中TNF-α、IL-1β含量顯著低于胰腺炎組 (P<0.01)。結論 血必凈可能通過抑制TNF-α、IL-1β的產生減輕胰腺炎癥。
【關鍵詞】 血必凈;胰腺炎;腫瘤壞死因子;干擾素
Abstract： Objective To investigate the protective effect of Xuebijing (XBJ) on acute pancreatitis in rats and its possible mechanism. Methods 48 SD rats were randomized into 3 groups: sham group, pancreatitis group and XBJ group, each group sub-divided into 4h and 8h subgroups. In the sham groups, the rats only underwent opening and closure of the abdomen; the pancreatitis groups received taurocholate sodium administration to establish animal model and the treatment groups were intervened by Xuebijing. The pathologic changes of pancreatic tissues were observed by optic microscopy. The expressions of tumor necrosis factor (TNF)-α and interleukin (IL)-1β in pancreatic tissues were determined by immunohistochemical methods. Results The histomorphological changes of the pancreatic tissues in XBJ group were much more relieved than those in the pancreatitis group. The expressions of TNF-α and IL-1β were significantly lower in XBJ group than those in the pancreatitis group (P<0.01). Conclusion XBJ could relieve acute pancreatitis in rats by inhibiting the production of TNF-α and IL-1β.
Key words: Xuebijing; pancreatitis; tumor necrosis factor-α; interleukin-1β
腫瘤壞死因子α(TNF-α)、干擾素1β(IL-1β)是引起組織細胞損傷的重要細胞因子，兩者均參與急性胰腺炎的病理過程。近年來已有關于血必凈對血液中細胞因子影響的報道[1-2]，但血必凈對急性胰腺炎時胰腺組織TNF-α、IL-1β的表達有無影響尚未見報道。本實驗旨在通過觀察血必凈注射液對大鼠胰腺組織TNF-α、IL-1β表達的影響，探討血必凈對大鼠急性胰腺炎的保護作用及可能機制。
1 材料和方法
1.1 動物模型與分組 將SD大鼠48只(體重200～250 g, 由徐州醫學院實驗動物中心提供)隨機分為假手術組、胰腺炎組和治療組(n=16)，假手術組僅行開關腹手術，胰腺炎組經胰膽管逆行注射5%牛磺膽酸鈉(2 ml/kg，美國Sigma公司)制作胰腺炎模型，治療組在胰腺炎模型基礎上予血必凈干預。術前3天，治療組經尾靜脈注射血必凈注射液4 ml·kg-1·d-1(天津紅日藥業股份有限公司生產);假手術組、胰腺炎組同時間點給予等量生理鹽水。3組分別于制模術后4h、8 h時點處死大鼠，取胰腺標本進行檢驗。
1.2 組織病理學檢查 切取胰腺標本制成石蠟切片后行蘇木精-伊紅染色,光鏡下觀察胰腺組織病理學變化。
1.3 TNF-α、IL-1β表達檢測 免疫組化染色法(試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司)測胰腺組織TNF-α、IL-1β表達，結果應用計算機進行圖像灰度分析，以積分光密度值(D)作計量分析，每張片選4個視野。
1.4 統計學處理 使用SPSS 11.0統計軟件進行統計，數據以±s表示。計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。
2 結 果
2.1 組織病理學結果 假手術組胰腺組織肉眼及鏡下結構無明顯異常。胰腺炎組肉眼觀胰腺明顯腫脹，伴有出血壞死;鏡下見間質血管擴張、淤血，灶狀胰腺腺泡與脂肪壞死，大量炎性細胞浸潤，紅細胞滲出，胰腺細胞結構消失。治療組肉眼病變及鏡下觀察組織結構破壞明顯減輕。
2.2 免疫組化測定 治療組TNF-α、IL-1β含量顯著低于胰腺炎組(P<0.01 )，見表1、2。表1 各組TNF-α的D值表2 各組IL-1β的D值(n=8,±s)與假手術組比較：*P<0.01;與胰腺炎組比較：△P<0.01
3 討 論
急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細胞、血管內皮細胞、胰島細胞均能產生TNF-α及IL-1β，兩者均是重要的炎癥介質，在急性胰腺炎的發病及其全身并發癥發生過程中起著重要作用，被作為急性胰腺炎發病后反映其嚴重程度的重要的早期指標[3]。兩者具有趨化性，能促進中性粒細胞的釋放，誘導單核細胞和多核粒細胞趨化浸潤到炎癥局部，并且進一步促進TNF-α和IL-1β的釋放，形成一種惡性循環。
血必凈注射液是在“菌、毒、炎并治”的理論指導下研制而成的水溶性溶液，因其在防治膿毒癥和多器官功能障礙綜合征(MODS)方面取得的顯著療效而受到重視。其主要成分有川芎、赤芍、丹參、紅花等，具有擴張血管，改善微循環與組織灌注，抑制血小板聚集，促進纖維組織重吸收、膠原纖維的降解及保護血管內皮細胞等作用，能抑制炎性介質的過度釋放，從而有效地減少損傷因子對機體的損傷[1,4]。
本實驗結果顯示：胰腺炎組TNF-α、IL-1β表達較假手術組明顯增加(P<0.01)，差異有統計學意義，說明TNF-α、IL-1β與急性胰腺炎發病有密切關系;治療組胰腺組織病理損傷變化較胰腺炎組明顯減輕，說明血必凈對急性胰腺炎有治療作用;同時治療組TNF-α、IL-1β表達較胰腺炎組明顯減少(P<0.01)，這一結果提示血必凈注射液可能通過減少TNF-α、IL-1β等炎性因子的產生，從而阻斷了炎癥介質的瀑布樣級聯反應，抑制了炎癥反應，從而減輕了胰腺損傷。
血必凈抑制TNF-α、IL-1β的產生的具體過程有待進一步研究，同時血必凈對急性胰腺炎的治療作用的機制可能是多方面的。
【參考文獻】
[1] 明自強，俞林明，呂銀祥，等. 血必凈對膿毒癥患者細胞因子的影響[J].現代中西醫結合雜志, 2008,17(27): 4219-4220.
[2] 鄭軍，劉文操. 血必凈對急性肺損傷大鼠炎癥相關細胞因子的影響[J].山西職工醫學院學報，2007,17(2): 1-3.
[3] 朱維銘,黎介壽. 重癥急性胰腺炎與促炎細胞因子和炎性介質的關系[J].醫學研究生學報, 2000,13(2):106-110.
[4] 邢柏，曾琦，王日興，等. 血必凈對急性胰腺炎相關性腎損傷的預防和治療作用[J].中國急救醫學,2008,28(8):683-685.
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