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高效液相色譜法測定甘草酸二銨注射液中有關物質
【論文關鍵詞】 甘草酸二銨；注射液；有關物質；高效液相色譜法
【論文摘要】 目的 建立高效液相色譜檢測甘草酸二銨注射液中有關物質。 方法 選用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液[或磷酸鹽緩沖溶液]—乙腈（62：38）；對其配比可用梯度法改變配比，使其理論塔板數不低于3000。流速1.0ml/min，進樣量10ul。 結果 在該色譜條件下，甘草酸二銨注射液分離良好。結論 本法靈敏、準確、簡便，可作為甘草酸二銨注射液有關物質的檢測方法。
甘草酸二銨 是甘草有效成分的第三代提取物，具有較強的與皮質醇類似餓非特異性的抗炎、保護肝細胞膜及改善肝功能的作用，可減少肝細胞的水腫、壞死。本研究采用HPLC法1］［一，二］，建立了甘草酸二銨注射液中有關物質的測定方法。
1 實驗
1.1 藥品和試劑
儀器:SP8800型高效液相色譜儀（美國Spectra-physics公司）
色譜柱：Kromasil C18(250×4.6mm,5µm)
試劑:磷酸（分析純）新鄉市化學試劑廠; 乙腈(色譜純)TEDIA company.INC USA； 鹽酸（藥用級）湖南爾康制藥有限公司； 氫氧化鈉（藥用級） 湖南爾康制藥有限公司；甘草酸二銨對照品 中國藥品生物制品所； 供試品（自制，批號：080714），純化水 自制。
2方法與結果：
2.1檢測波長的選擇：因紫外最大吸收波長為252nm，并根據其含量測定時選用的波長252nm，仍選此波長作為液相的檢測波長。
2.2色譜條件：選用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液[或磷酸鹽緩沖溶液]—乙腈（62：38）；對其配比可用梯度法改變配比，使其塔板數不低于3000。流速1.0ml/min，進樣量10ul。
3系統適用性試驗：取本品5ml于25ml容量瓶中，加水至刻度，制成1mg/ml(或0.5mg/ml，以出峰情況定)的溶液，進樣10ul，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍，實現主峰與雜質峰完全分離或達到基線分離，并且理論塔板數不低于3000。
結果：樣品(批號：080714)的主峰與雜質能夠完全分離，理論塔板數為9802；有關物質為4.8%。
4專屬性試驗：
4.1 酸破壞試驗：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，放置2小時后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml中和，再加水至刻度，作為酸破壞溶液。
4.2 堿破壞試驗：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，放置2小時后，加鹽酸溶液1mol/L 5ml中和，再加水至刻度，作為堿破壞溶液。
4.3 氧化破壞試驗：取本品5ml于25ml容量瓶中，加30%雙氧水溶液1ml，放置2小時后，置水浴80℃加熱1小時除去剩余的雙氧水，再加水至刻度，作為氧化破壞溶液。
4.4 高溫破壞試驗：取樣品于110℃加熱2小時后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作為高溫破壞溶液。
4.5 光照破壞試驗：取樣品于紫外燈下365nm波長光照4小時后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作為光照破壞溶液。
取以上5種溶液，分別進樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。分析結果。要求：各雜質峰與主成份峰分離效果良好。
結果：各雜質峰與主成份峰分離效果良好；其中各項試驗的有關物質為：
6最小檢測限：取本品，按濃度稀釋法進樣分析（分別按10、100、1000、10000、100000倍稀釋），測定色譜系統基線。以信噪比為3：1時的進樣量為檢測限。計算得本條件下的甘草酸二銨的檢測限。
結果：測得最小檢測限為：1.5ng/ml。
7精密度試驗：取甘草酸二銨對照品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋至約0.1mg/ml的溶液，進樣10μl，重復進樣5次，記錄色譜圖，結果峰面積的RSD為0.46%，表明該溶液進樣精密度良好。
8穩定性試驗：取本品，制成1mg/ml的溶液，每隔2小時測定1次，考察甘草酸二銨注射液12小時的穩定性，要求：RSD〈2%。
結果：其總有關物質RSD為1.2%，最大雜質RSD為0.83%，次大雜質為1.6%，其表明穩定性良好。
9有關物質的測定：
精密稱取本品適量，用水稀釋制成每1ml中約含1mg溶液，作為供試品溶液。精密稱取供試品溶液適量，用水稀釋成每1ml中含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液10ul注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%-25%，再精密量取供試品溶液與對照品溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中各雜質峰面積的和不得大于對照品溶液主峰面積（10%）；其中供試品溶液色譜圖中最大雜質峰面積不得大于對照品溶液主峰面積的2/5（4%，次大雜質峰面積不得大于對照品溶液主峰面積的1/4(2.5%).
10討論
（1）本試驗采用HPLC法測定甘草酸二銨注射液中的有關物質，操作簡便、快速，測定結果準確可靠，從而能有效地控制該的質量。（2）在流動相的選擇比較了乙腈-水系統、乙腈-磷酸溶液系統等，發現甘草酸二銨與有關物質不能很好地分離，且色譜圖中主成分峰有明顯的脫尾現象，方法不合理。后來試加入磷酸鹽緩沖液，結果能使甘草酸二銨與有關物質達到良好的分離，并消除了主峰脫尾現象。（3）在主藥的稀釋溶劑選擇上，考慮到甘草酸二銨易溶于水，比較了用流動相和水作為溶劑進行了檢測，發現兩種供試樣品的色譜圖中，主峰與有關物質都能達到很好的分離，且檢測結果無明顯差異。為方便操作和節約，選用純化水作為稀釋溶劑。
【參考文獻】
1 國家藥典委員會.中國藥典二部,2005年版.北京：化學出版社
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