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高效液相色譜法測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量
【摘 要】 目的 建立高效液相色譜法測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量。方法 采用Agilengt Eclipse Plus -C18色譜柱，流動相：乙腈-0.1%磷酸(14：86);流速：0.6 ml•min-1;檢測波長230 nm。結果 芍藥苷在0.4800～8.160 μg范圍內線性關系良好(r=0.9999)，平均回收率為98.94%，RSD=0.36%(n=6)。結論 本方法操作簡便，專屬性強，結果準確，可用于測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量。
【關鍵詞】 芎鉤天麻丸;含量測定;芍藥苷;高效液相色譜法
[Abstract] Objective To establish a HPLC method for the determination of Paeoniflorin in xionggoutianma pills. Methods The chromatographic system consisted of C18 column,using Acetonitrile -0.1% Phosphate (14：86) as mobile phase.The content was detected at a waveleng of 230nm,the flow rate was 0.6ml•min-1 .Results The Paeoniflorin have a good tincar rolatim in the range of0.0433～0.6938μg(r=0.9999),the average recovery was 98.94%，RSD=0.36%(n=6). Conolusion The established method is accuracy ,sensitive and simple.It can be used for quality control of xionggoutianma pills.
[Keywords] xionggoutianma pills; Chlorogenic acid; content determination; HPLC
芎鉤天麻丸是由川芎、鉤藤、當歸、石決明、桑寄生、細辛、珍珠母、黃芩、白芍、天麻等14 味藥材加工制成的醫院制劑，具有滋腎平肝、潛陽熄風、除暈止痛、降血壓之功效，主治肝陽上亢、血虛失養引起的高血壓，緊張性、血管性神經性頭疼、頭暈 [1]。白芍為方中君藥，芍藥苷為白芍的主要有效成分，具有擴張血管、保護腦缺血、抗血栓、抗血小板聚集、抗高血脂等作用，對芎鉤天麻丸療效的發揮起重要作用。現行質量標準中未收載含量測定項目，不能有效的控制藥品質量。本文以芍藥苷為指標成分，建立了測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的高效液相測定法，為該制劑的質量控制提供了客觀的含量評價方法。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
Agilengt 1260高效液相色譜儀，AUW-220 D電子分析天平 DSQ10260超聲儀。
1.2 試藥
芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110736-201035);乙腈為色譜純，水為本單位自制重蒸餾水，其余試劑為分析純。芎鉤天麻丸由柘城縣人民醫院提供。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱(4.6×100 mm)
流動相：乙腈-0.1%磷酸(14：86)為流動相[2];流速0.6 ml•min-1;檢測波長230 nm;進樣量10 μl;理論板數按芍藥苷峰計算應不低于3000[3]。
2.2 線性關系考察
取黃芩苷對照品約12.0 mg，精密稱定，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按照“2.1”項色譜條件，分別進樣1、3、5、7、9、11、 13、15、17 μl，記錄芍藥苷峰面積值，以峰面積積分值(Y)對對照品濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程： Y=235.05674X+12.52003 r=0.9999。結果表明，黃芩苷對照品在0.4800～8.1600 μg范圍內與峰面積值呈良好的線性關系。
2.3 供試品溶液及陰性對照溶液的制備
取本品約0.1 g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，浸泡4 小時，超聲處理20 分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 um微孔濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液。另取缺白芍的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對照溶液。
2.4 干擾試驗
取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μl，按照“2.1”項色譜條件，分別進樣測定，記錄色譜圖，黃芩苷的保留時間為8.818 min，理論塔板數為3512，黃芩苷與相鄰峰的分離度大于1.5，峰型對稱。陰性樣品無干擾，結果見圖1。
C陰性對照溶液
圖1 高效液相色譜圖
2.5 精密度試驗
取2.2對照品溶液，重復進樣6 次，每次10 μl，記錄綠原酸峰面積，RSD=0.39%(n=6)，表明精密度良好。
2.6 穩定性試驗
取同一對照品溶液，分別在0、2、4、8、12、16、24 h進樣測定，RSD=0.43%，供試品溶液在24 小時內峰面積基本穩定。
2.7 加樣回收率試驗
稱取6 份已知含量為6.173 mg/g的樣品約0.05 g，精密稱定，分別置1～6 號錐形瓶中，分別精密加入對照品儲備液1 ml，按照“2.4”項下供試品溶液制備方法制備溶液，按照“2.1”項色譜條件，分別測定，結果見表1。
表1 加樣回收率試驗結果
稱樣量 樣中黃芩苷的含量 對照加入量 測得黃芩苷的含量 回收率 平均回收率 RSD
(g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)
0.05132 0.3168 0.4800 0.7904 99.20
0.04937 0.3048 0.4800 0.7806 99.46
0.04898 0.3024 0.4800 0.7729 98.79 98.94 0.36
0.05064 0.3126 0.4800 0.7809 98.52
0.05028 0.3104 0.4800 0.7828 99.04
0.04966 0.3066 0.4800 0.7759 98.64
2.8 樣品測定
取3批樣品，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，各進樣10 μl，按外標法計算綠原酸的含量，結果見表2。
表2 3批樣品中黃芩苷的含量
樣品編號 1 2 3
樣品含量(mg/g) 6.092 6.123 6.112
3 討論
3.1 提取溶劑的選擇
有文獻報道以稀乙醇為提取溶劑[3]，經過比較發現以甲醇為溶劑測定含量所得的含量高。
3.2 流動相選擇
本試驗曾用甲醇-0.05 mol/l磷酸二氫鉀溶液(40∶65)為流動相[4]，主成分峰出峰效果較差，而采用乙腈-0.1%磷酸(14：86)為流動相，色譜峰顯示，黃芩苷與相鄰的組分分離度大于1.5，具有較好的分離效果，且理論板數較高。
參考文獻
[1] 河南省醫療機構制劑標準.
[2] 中國藥典[S].2010年版.一部.96-97.
[3] 謝文健HPLC法測定莪棱膠囊中芍藥苷的含量[J].中國藥師2010,13(4):592-593.
[4] 中國藥典[S].2010年版.一部.147-148.
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